PCR是聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase  Chain  Reaction  )的簡稱。 該方法又稱特異性DNA序列體外引物靶向酶擴(kuò)增法，可特異性擴(kuò)增極微量靶DNA數(shù)百萬倍，是基因擴(kuò)增技術(shù)的一大創(chuàng)新。

　　PCR技術(shù)以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、對檢測樣品要求低、方便快捷等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于各種臨床診斷。 目前國內(nèi)二級(jí)以上醫(yī)院開展了PCR技術(shù)的各種臨床應(yīng)用，PCR實(shí)驗(yàn)室是承載PCR技術(shù)應(yīng)用的設(shè)施，只有實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)計(jì)才能確保檢測結(jié)果的可靠性，因此PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)和建設(shè)越來越受到建設(shè)部門的重視。

　　從PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局、通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)兩方面進(jìn)行設(shè)計(jì)要點(diǎn)分析，供設(shè)計(jì)同行和建筑公司相關(guān)人員參考。

　　壹

　　PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局設(shè)計(jì)要點(diǎn)分析

　　1、平面功能分區(qū)要點(diǎn)分析

　　根據(jù)第《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》 1.1條的要求，PCR實(shí)驗(yàn)室通常由試劑儲(chǔ)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)4個(gè)區(qū)域組成。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置不固定，需要說明以下幾種情況。

　　樣品擴(kuò)增前需要粉碎處理時(shí)，需要增加用于樣品粉碎的區(qū)域；

　　采用實(shí)時(shí)熒光PCR方法可將擴(kuò)增區(qū)和分析區(qū)合并為一個(gè)區(qū)；

　　采用全自動(dòng)化PCR分析儀，可將標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和分析區(qū)合并為一個(gè)區(qū)。

　　2、實(shí)驗(yàn)室功能及設(shè)備設(shè)計(jì)要點(diǎn)分析

　　(1)試劑儲(chǔ)備區(qū)

　　該區(qū)域主要完成試劑和主反應(yīng)混合液的儲(chǔ)存、配制和密封工作。 運(yùn)到本區(qū)域的所有試劑和材料不得通過其他區(qū)域，試劑和原材料必須在本區(qū)域內(nèi)儲(chǔ)存和制造。 這個(gè)區(qū)域的氣壓要對外界保持正壓。 該區(qū)域的設(shè)備主要有冰箱、天平、攪拌機(jī)、低速離心機(jī)、加樣器、可移動(dòng)紫外線燈等。 由于這個(gè)區(qū)域有很多試劑，“安全”是平面設(shè)計(jì)的首要考慮，平面設(shè)計(jì)時(shí)需要通風(fēng)順暢，逃生順暢。 首先，實(shí)驗(yàn)臺(tái)布置在房間兩側(cè)，中間的通道都通向走廊，便于疏散。 另外，按照國際人體工程學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)臺(tái)和實(shí)驗(yàn)臺(tái)的通道設(shè)計(jì)為1500mm，中間通道可以滿足兩邊人中間人的要求。

　　(2)標(biāo)本制備區(qū)

　　該領(lǐng)域的功能包括標(biāo)本保存、核酸提取和貯藏、標(biāo)本添加到擴(kuò)增反應(yīng)管和DNA合成的測定。 樣品直接運(yùn)輸?shù)奖緟^(qū)域儲(chǔ)存在本區(qū)域內(nèi)，不得通過其他區(qū)域。 對于氣流壓力的控制，在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行樣品操作可能產(chǎn)生氣溶膠傳播，本區(qū)應(yīng)保持外界負(fù)壓，以免氣溶膠傳播擴(kuò)散對外界造成污染； 同時(shí)，本區(qū)采用擴(kuò)增反應(yīng)混合物制備和對擴(kuò)增區(qū)及擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)正壓，避免鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠傳播污染。該區(qū)域的設(shè)備主要有生物安全柜、加樣器、臺(tái)式高速離心機(jī)、臺(tái)式低速離心機(jī)、水浴鍋、冰箱、攪拌機(jī)和可移動(dòng)紫外線燈等。 其中值得注意的是，生物安全柜優(yōu)選B2型。 該生物安全柜所有吸入氣流和垂直氣流均經(jīng)高效過濾器過濾后向室外排出，不再進(jìn)入生物安全柜循環(huán)或返回該區(qū)域。 該生物安全柜可避免提取核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，標(biāo)本交叉“污染”，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

　　(3)放大區(qū)域

　　該區(qū)域的功能是DNA擴(kuò)增和擴(kuò)增片段的測定。 另外，來自試劑儲(chǔ)存制備區(qū)域的反應(yīng)混合液、制備的DNA模板、來自樣品制備區(qū)域的反應(yīng)混合液的添加等也可以在該區(qū)域進(jìn)行。 要控制氣流壓力，對相鄰區(qū)域施加負(fù)壓，防止氣溶膠傳播從本區(qū)泄漏。 為避免氣溶膠傳播污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的行走。 個(gè)別操作，如樣品添加等應(yīng)在潔凈臺(tái)中進(jìn)行。

　　該區(qū)域設(shè)備主要為核酸擴(kuò)增熱循環(huán)、加樣器、超凈長椅等。 其中熱循環(huán)電源應(yīng)專用，并配有穩(wěn)壓電源或UPS，以防止電壓波動(dòng)對放大測量的影響。

　?。?)分析區(qū)域

　　這個(gè)領(lǐng)域的功能是擴(kuò)增產(chǎn)物的分析。 這個(gè)地區(qū)可能會(huì)使用引起基因突變的有毒物質(zhì)，所以要特別注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。 對于氣流壓力的控制，該區(qū)域是PCR實(shí)驗(yàn)的最后一步，壓力必須最低，對鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以免氣溶膠傳播從該區(qū)域漏出。 為避免氣溶膠傳播污染，應(yīng)盡量減少本區(qū)內(nèi)不必要的出行。

　　該區(qū)域的設(shè)備主要有標(biāo)本盛放裝置、電泳裝置(罐)、電泳裝置、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標(biāo)儀、洗衣機(jī)等。

　　3、人流與材料流線設(shè)計(jì)要點(diǎn)分析

　　進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室區(qū)域的工作人員請遵循以下路徑。

　　通道緩沖室實(shí)驗(yàn)區(qū)域

　　工作人員離開實(shí)驗(yàn)室的路徑如下：

　　實(shí)驗(yàn)區(qū)域緩沖室通路

　　進(jìn)入每個(gè)區(qū)域必須嚴(yán)格地沿單一方向進(jìn)行，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。 工作人員離開時(shí)，不能把工作服帶出去。 這種人流單向流動(dòng)可以降低人流造成的交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。

　　所有物品進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)必須通過雙層門聯(lián)鎖的傳遞窗，用傳遞窗消毒后方可進(jìn)入，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)所有物品也必須通過傳遞窗才能傳遞到實(shí)驗(yàn)室以外的清潔公共區(qū)域。 這類物品有組織的單向流動(dòng)，可以降低物品錯(cuò)誤和混淆的風(fēng)險(xiǎn)。