PCR實(shí)驗(yàn)室也叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫(xiě)。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于擴(kuò)增特定的DNA片段，可視為體外特殊的DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng)，可以快速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其準(zhǔn)確度高達(dá)納米級(jí)。可以準(zhǔn)確檢測(cè)患者體內(nèi)乙肝病毒的數(shù)量、復(fù)制、感染、傳染性強(qiáng)、是否需要服藥、肝功能是否有異常變化?？梢约皶r(shí)判斷哪些抗病毒藥物最適合患者，判斷藥物療效，為臨床治療提供可靠的檢查依據(jù)。

　　PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，如：艾滋病、乙型肝炎、禽類疾病和癌基因的檢測(cè)和診斷、DNA指紋、個(gè)體識(shí)別、親子鑒定和法醫(yī)學(xué)證據(jù)、動(dòng)植物檢疫、動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品檢測(cè)、動(dòng)物飼料、化妝品和食品衛(wèi)生檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因作物和轉(zhuǎn)基因微生物檢測(cè)等。

　　傳染病大流行平均每1~2年發(fā)生一次，如2003年嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS冠狀病毒)、2005年禽流感病毒(HSN1禽流感病毒)、2008年手足口病(腸道病毒)、2011年發(fā)熱伴血小板綜合征(新布尼亞病毒)、2013年流感病毒(H7N9病毒)。2014年的禽流感(H10N8病毒)和伊波拉病毒，2015年的禽流感病毒(H5N6病毒)，2016年的塞卡病毒，以及目前的新型冠狀病毒(新冠肺炎病毒)。疫情的特點(diǎn)是起病急、進(jìn)展快、傳染性強(qiáng)，因此快速準(zhǔn)確地鑒定傳染病病原體是控制疫情的關(guān)鍵因素。這類疾病的診斷多通過(guò)核酸擴(kuò)增檢測(cè)，而這一過(guò)程需要在高標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室中由專業(yè)人員完成，因此PCR實(shí)驗(yàn)室在重大傳染病防控中的診斷和服務(wù)成為不可或缺的力量。PCR實(shí)驗(yàn)室可開(kāi)展的病原微生物檢測(cè)除病毒性傳染病外，還包括細(xì)菌、真菌、原蟲(chóng)等疾病的診斷，如巨細(xì)胞病毒、EB病毒、結(jié)核分枝桿菌、甲型和乙型流感病毒肺炎、支原體和衣原體感染、乙型肝炎、丙型肝炎、戊型肝炎等。PCR實(shí)驗(yàn)室在疾病診斷和控制中發(fā)揮著極其重要的作用。

　　標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域：試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)、樣品處理區(qū)、核酸擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)。為了避免交叉污染，進(jìn)入每個(gè)工作區(qū)必須嚴(yán)格遵循單一方向，即只有試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物制備區(qū)和擴(kuò)增區(qū)，擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑和樣品的轉(zhuǎn)移要通過(guò)轉(zhuǎn)移窗進(jìn)行。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室可以以分散或組合的形式存在。完成一套PCR實(shí)驗(yàn)，通常有四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程：試劑準(zhǔn)備、樣品處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析。

　　1.分散式PCR實(shí)驗(yàn)室：

　　所謂分散式PCR實(shí)驗(yàn)室，是指完成上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)室彼此相距甚遠(yuǎn)，呈分布式分布。對(duì)于PCR實(shí)驗(yàn)室的這種布置，不需要特殊的條件，因?yàn)楦鱾€(gè)實(shí)驗(yàn)不容易相互干擾。

　　2.聯(lián)合PCR實(shí)驗(yàn)室：

　　所謂組合式PCR實(shí)驗(yàn)室，是指將完成PCR四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)室相鄰布置，形成獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)的形式。對(duì)于組合式PCR實(shí)驗(yàn)室，由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的集中布局，容易造成相互干擾，所以對(duì)整體布局和無(wú)特定病原體有一定要求。每個(gè)房間在入口處設(shè)置緩沖室，減少室內(nèi)外空氣交換。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室的主要功能

　　1.試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)的功能是：儲(chǔ)存試劑的制備，試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合物的制備，以及消耗品如離心管和吸頭的儲(chǔ)存和制備。用于標(biāo)本制備的儲(chǔ)存試劑、耗材等材料應(yīng)直接運(yùn)送到試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)，不能經(jīng)過(guò)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)。試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品和質(zhì)控品不應(yīng)存放在該區(qū)域，而應(yīng)存放在標(biāo)本處理區(qū)。

　　2.標(biāo)本制備區(qū)的作用是提取、儲(chǔ)存核酸(RNA和DNA)并將其加入擴(kuò)增反應(yīng)管。涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。因?yàn)闅馊苣z造成的污染可能發(fā)生在樣品混合和核酸純化的過(guò)程中，我們可以在這個(gè)區(qū)域設(shè)置正壓條件，避免氣溶膠污染從鄰近區(qū)域進(jìn)入這個(gè)區(qū)域。為了避免樣品之間的交叉污染，在加入待測(cè)核酸后，必須覆蓋含有反應(yīng)混合物的反應(yīng)管。對(duì)于潛在的感染性材料，必須在生物安全柜中打開(kāi)蓋子，并有明確的樣品處理和滅活程序。

　　3.核酸擴(kuò)增區(qū)的功能有：DNA合成、DNA擴(kuò)增和檢測(cè)。為了避免氣溶膠造成的污染，我們應(yīng)該盡量減少在這個(gè)地區(qū)的步行。必須注意的是，所有測(cè)試過(guò)的反應(yīng)管不得在該區(qū)域打開(kāi)。

　　4.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的功能是：對(duì)擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析和測(cè)定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測(cè)序等。分析核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的方法有很多，如膜或微孔板或芯片上的探針雜交(放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記)、直接或酶消化后的瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測(cè)序、質(zhì)譜等。

　　擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是PCR實(shí)驗(yàn)室中最重要的擴(kuò)增產(chǎn)物。

　　物污染來(lái)源，因此應(yīng)注意避免通過(guò)本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，必須使用洗板機(jī)洗板，廢液必須收集至1mol/LHCl中，并且不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。用過(guò)的吸頭也必須放至1mol/LHCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故應(yīng)當(dāng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)主要依據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)

　　《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范附錄體外診斷試劑》、《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范體外診斷試劑現(xiàn)場(chǎng)檢查指導(dǎo)原則》條款中，明確對(duì)PCR試劑的生產(chǎn)和檢驗(yàn)環(huán)境做出規(guī)定。此外現(xiàn)行衛(wèi)生行業(yè)的法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)以及相關(guān)文獻(xiàn)中對(duì)于PCR檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室均作出規(guī)定，主要涉及《全國(guó)臨床檢驗(yàn)規(guī)程》(第三版)、《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理辦法》、《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》及《臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)的應(yīng)用》等行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)要點(diǎn)

　　1、主體結(jié)構(gòu)

　　主體為潔凈彩鋼板和鋁合金型材。房間內(nèi)外角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁，解決了易污染、積灰、清洗困難的問(wèn)題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡(jiǎn)潔美觀大方，密封性能好。

　　2、標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和壓差控制

　　將PCR過(guò)程分為試劑制備、樣品制備和PCR擴(kuò)增檢測(cè)三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)。整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)都有一個(gè)緩沖區(qū)。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

　　3、消毒

　　紫外線燈安裝在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)、三個(gè)緩沖區(qū)的頂部和轉(zhuǎn)移窗內(nèi)進(jìn)行消毒。在試劑制備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動(dòng)式紫外線燈，對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)進(jìn)行局部消毒。

　　4、機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗

　　試劑和標(biāo)本通過(guò)機(jī)械聯(lián)鎖不銹鋼(不推薦電子聯(lián)鎖)傳輸窗口傳輸，確保試劑和標(biāo)本在傳輸過(guò)程中不受污染(人物分流)。

　　5、地面

　　地面一般采用PVC卷材地面或自流地板，整體性好。易清潔，耐腐蝕。也可以使用水磨石地面，或大瓷磚(至少800mm 800mm)接縫需要小于2mm。盡量避免產(chǎn)塵和積塵現(xiàn)象。

　　6、照明

　　燈具應(yīng)選用凈化燈具，便于清潔、無(wú)塵。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備

　　1、試劑準(zhǔn)備區(qū)儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺(tái)、加樣器、混勻器、天平和離心機(jī)等,加樣器、天平除了要專用外,還應(yīng)定期校準(zhǔn)。試劑分裝應(yīng)在超凈臺(tái)中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級(jí)的,試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢:一是否有污染、二是檢測(cè)試劑的擴(kuò)增效果;

　　2、標(biāo)本制備區(qū)儀器設(shè)備主要有生物安全柜、加樣器、離心機(jī)、溫育儀、混勻器等;

　　3、擴(kuò)增區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)增儀、超凈臺(tái)、微量加樣器、離心機(jī)可移動(dòng)紫外燈。擴(kuò)増儀需進(jìn)行校準(zhǔn)。并配備UPS電源,以防止由于電壓的波動(dòng),停電對(duì)擴(kuò)增效果的影響。

　　4、分析區(qū)所使用的儀器設(shè)備主要有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、加樣器和水浴箱、DNA測(cè)序儀等。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室裝修建設(shè)主要造價(jià)估價(jià)：

　　PCR實(shí)驗(yàn)室對(duì)潔凈和恒溫恒濕有不同需求，所以一般會(huì)分為以下幾類：

　　1、對(duì)潔凈度沒(méi)有明確要求的PCR實(shí)驗(yàn)室整體裝修造價(jià)約2500~3000元/㎡;

　　2、潔凈度為十萬(wàn)級(jí)的恒溫恒濕潔凈要求的PCR實(shí)驗(yàn)室整體裝修造價(jià)約3000~4000元/㎡;

　　以上估價(jià)是我公司按以往項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)總結(jié)的大概估價(jià)，僅供參考，其包含內(nèi)容：彩鋼板裝飾裝修、地面、電氣照明插座、紫外線滅菌、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)、自控系統(tǒng)、實(shí)驗(yàn)家具和給排水等內(nèi)容。不含實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備、消防和環(huán)保處理部份。